藥物研發(fā):在新藥篩選和藥物毒性評估中,CCK-8 細胞活力檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用。例如,在抗腫瘤藥物研發(fā)過程中,科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細胞系,一定時間后加入 CCK-8 溶液檢測細胞活力。通過計算藥物對細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50),評估藥物的抗腫瘤活性和毒性,為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持,篩選出具有潛力的候選藥物。
細胞生物學(xué)研究:在細胞增殖、分化、凋亡等基礎(chǔ)細胞生物學(xué)研究中,該試劑盒用于實時監(jiān)測細胞狀態(tài)。如在干細胞分化研究中,使用 CCK-8 檢測不同誘導(dǎo)條件下干細胞的活力變化,判斷細胞是否成功分化以及分化過程中細胞活力的動態(tài)變化,為揭示細胞分化機制提供依據(jù) 。
毒理學(xué)研究:在評估化學(xué)物質(zhì)、環(huán)境污染物等對細胞的毒性作用時,CCK-8 法是常用的檢測手段。例如,檢測重金屬離子對肝細胞的毒性,將肝細胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中,利用 CCK-8 試劑盒檢測細胞活力,確定重金屬的毒性劑量和作用機制,為環(huán)境安全評估和毒理學(xué)研究提供數(shù)據(jù)。
使用方法
細胞接種:將對數(shù)生長期的細胞消化后,用培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度,接種到 96 孔板中,每孔加入適量細胞懸液,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
藥物處理(如需):根據(jù)實驗?zāi)康模蚩字屑尤氩煌瑵舛鹊乃幬锘蛱幚硪蛩兀^續(xù)培養(yǎng)一定時間。
CCK-8 檢測:向每孔加入適量 CCK-8 溶液,輕輕混勻后,將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(具體時間根據(jù)細胞類型和實驗條件確定)。
吸光度測定:使用酶標儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值,根據(jù)標準曲線計算細胞活力和細胞數(shù)量。
注意事項
試劑儲存:CCK-8 試劑盒應(yīng)避光保存于 4℃冰箱,避免反復(fù)凍融,否則會影響試劑活性。
操作規(guī)范:實驗過程中應(yīng)嚴格遵守無菌操作原則,避免污染。加入 CCK-8 溶液時,避免產(chǎn)生氣泡,以免影響吸光度測定。
干擾因素:某些具有還原性的物質(zhì)可能會與 WST-8 發(fā)生反應(yīng),影響檢測結(jié)果,實驗前需評估樣品中是否存在此類干擾物質(zhì),并進行相應(yīng)處理。
對照設(shè)置:實驗中應(yīng)設(shè)置空白對照(只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液)、陰性對照(正常培養(yǎng)的細胞)和陽性對照(已知具有細胞毒性或促進細胞生長作用的物質(zhì)處理的細胞),確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性 。